G-Biosciences離心式脫鹽柱Spin-OUT GT-1200 Medi的使用步驟

G-Biosciences Spin-OUT GT-1200，與Pharmacia的Sephadex G-50的功能類似，都是用來(lái)代替比較耗時(shí)的傳統(tǒng)透析處理，以達(dá)到快速純化蛋白/替換蛋白質(zhì)緩沖液的目的，不過(guò)前者是離心式的，后者是重力式的。GT-1200適宜于純化分子量大于12，000的蛋白質(zhì)，有兩種上樣量規(guī)格的：Micro和Medi。沒(méi)有現(xiàn)成的使用說(shuō)明材料，聽(tīng)朋友介紹這是非常不錯(cuò)的品牌，在國(guó)外很火。感興趣之余啃下其英文說(shuō)明書了，先了解下其使用步驟：

一、使用前準(zhǔn)備：

     1.上下顛倒數(shù)次，將管中的凝膠懸浮起來(lái)，然后100×g離心1min，讓膠體回到管底。這里有兩點(diǎn)需要注意的：1）新的柱子看過(guò)去幾乎是透明的，不要認(rèn)為什么填料都沒(méi)有，其實(shí)是顆粒太細(xì)了；2）離心力是×g，在離心機(jī)上顯示的是RCF這個(gè)單位，而不是RPM。這兩個(gè)單位有本質(zhì)區(qū)別，需要特別留意。其中：

     RPM(revolution per minute)為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)(單位:周/分鐘)；RCF(relative centrifugal force)為相對(duì)離心力，以地心引力即重力加速度的倍數(shù)來(lái)表示，一般用×g表示。 兩者轉(zhuǎn)換關(guān)系如下： RCF=0.0011×r×RPM^2 RPM=(909×RCF÷r)^0.5 r為離心機(jī)轉(zhuǎn)子半徑(單位:米)。

      2.拔掉兩頭的塞子，將柱子放在10ml離心管中，1,000×g離心2min以移除儲(chǔ)存buffer。離心完成后，即可看見(jiàn)白色的填充料。

二、開(kāi)始使用（交換buffer）

1.  用緩沖液平衡柱子：加入1-2ml緩沖液，將柱子放到10ml離心管中，靜置數(shù)分鐘讓緩沖液全部進(jìn)入柱體后，再重復(fù)加入3-5次。zui后以1,000×g離心2min，棄掉收集到的溶液，以保證buffer被全部替換了。

2.  將柱子放到新的離心管中，緩慢加入蛋白質(zhì)樣品。注意，上樣量為Medi的柱子zui多加入0.5ml樣品，上樣量為Micro的柱子zui多加入0.1ml樣品。樣品加在柱子中間的凝膠上，而不要碰到樹(shù)脂部件。加樣結(jié)束后靜置1-2min，讓凝膠充分將樣品吸收。

3.  將柱子放到一個(gè)新的離心管中，1,000×g離心4min，即可獲得純化好樣品了。

三、柱子的再生

1.  柱子可以重復(fù)利用。

2.  需要用到2×蛋白質(zhì)洗脫buffer，用量是每1ml填料使用1ml buffer。

3.  加入洗脫buffer后靜置5min。

4.  再用5倍填料體積的去離子水沖洗柱子。

5.  zui后用30% 的乙醇保存在4℃條件下。